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免費代測人缺血修飾性白蛋白ELISA檢測試劑盒
更新時間:2014-01-07   點擊次數(shù):1346次

本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

 

試驗原理:

IMA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知IMA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。ELISA檢測試劑盒先將IMA和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IMA的濃度呈比例關系。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

操作步驟

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,ELISA檢測試劑盒甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

局限

6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。

 

結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IMA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IMA含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

 

3、ELISA檢測試劑盒檢測值范圍:0-80ng/ml

 

4、敏感度: 0.1 ng/ml

DMEM細胞培養(yǎng)基A高糖、谷氨酰胺、丙酮酸鈉B高糖、谷氨酰胺C高糖、丙酮酸鈉D低糖、谷氨酰胺、丙酮酸鈉E無酚紅 Y74389 500毫升
RPMI 1640細胞培養(yǎng)基A谷氨酰胺、高糖B丙酮酸鈉、HEPES、高糖C高糖、谷氨酰胺、HEPESD谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES Y74390 500毫升
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胰蛋白酶(0.25%)乙二胺四乙酸混合液 Y74392 100毫升
乙二胺四乙酸(EDTA)細胞脫離溶液 Y74393 100毫升
Hanks平衡鹽緩沖溶液(HBSS) Y74394 500毫升
Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液(HBSS) Y74395 500毫升
Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液(HBSS)不含NaHCO3 Y74396 500毫升
10倍Hanks平衡鹽緩沖溶液(HBSS) Y74397 500毫升
標準磷酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液 Y74398 500毫升
鈣鎂磷酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液 Y74399 500毫升
10倍磷酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液(0.1 M) Y74400 500毫升
*氨基酸補充溶液(1X) Y74401 100毫升
*氨基酸補充溶液(10X) Y74402 100毫升
青鏈霉素混合液 Y74403 100毫升
新生牛血清 Y74404 500毫升
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