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鹽析法與抗體的分離純化
更新時間:2016-10-20   點擊次數(shù):2913次

鹽析法原理
蛋白質(zhì)的溶解度在必定范圍內(nèi) 隨鹽的濃度改變而改變。在低鹽濃度下溶解度跟著鹽濃度添加而添加,當(dāng)鹽濃度到達(dá)必定水平常,其溶解度又以不一樣程度降低并先后分出。其原理是因為蛋白質(zhì)分子的極性基團(tuán)有著靜電引力,當(dāng)水中參加少數(shù)鹽類時,鹽類離子與水分子對蛋白質(zhì)分子上極性基團(tuán)的影響,使蛋白質(zhì)在水中溶解度增大。但鹽濃度添加到必定程度時,水的活度降低,蛋白質(zhì)外表的電荷被中和,水化膜損壞,致使蛋白質(zhì)分子互相集合而沉積。鹽析法即是依據(jù)不一樣蛋白質(zhì)在必定濃度的鹽溶液中溶解度不一樣而到達(dá)互相別離的辦法。
鹽的挑選
蛋白質(zhì)鹽析常用中性鹽,主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其間使用zui廣的是硫酸銨,其長處是溫度系數(shù)小,溶解度大(25℃時飽滿溶解度為4.1mol/L,即767g/L)。在不一樣的飽滿硫酸銨溶液范圍內(nèi),不一樣蛋白質(zhì)依次分出;并且硫酸銨價廉易得,分段效果好,不簡單導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。
硫酸銨濃溶液的pH常在4.5~5.5之間,市售的硫酸銨還常富含少數(shù)游離硫酸,pH值通常在4.5以下,須用氨水調(diào)節(jié)其pH值至7.0擺布。
鹽析時的留意疑問
1、鹽的飽滿度:鹽的飽滿度是影響蛋白質(zhì)鹽析的主要因素,不一樣蛋白質(zhì)的鹽析請求鹽的飽滿度不一樣。別離幾個混合組分的蛋白質(zhì)時,鹽的飽滿度常由低到高逐步添加,每呈現(xiàn)一種蛋白質(zhì)沉積進(jìn)行離心別離后,再繼續(xù)添加鹽的飽滿度,使第二種蛋白質(zhì)沉積。如用硫酸鹽鹽析別離血漿蛋白,當(dāng)飽滿度到達(dá)20%時,纖維蛋白原首先分出;飽滿度增至28%~33%時,優(yōu)球蛋白分出;飽滿度到達(dá)33%~50%時,球蛋白分出;飽滿度大于50%以上時,清蛋白分出,免疫球蛋白常在飽滿度在33%開端分出。
2、pH值:在等電點時,蛋白質(zhì)溶解度zui小,簡單沉積分出。因而,鹽析時除個別特殊情況外,pH值常挑選在被別離的蛋白質(zhì)等電點附近。
3、蛋白質(zhì)濃度:在一樣鹽析條件下,蛋白質(zhì)濃度越高越易沉積,高濃度雖對沉積有利,但濃度過高,也簡單導(dǎo)致別的蛋白的共沉積,因而,有必要挑選恰當(dāng)濃度,盡可能避免共沉積效果的攪擾。
4、溫度:因為高濃度的鹽溶液對蛋白質(zhì)有必定保護(hù)效果,鹽析操作一般可在室溫下進(jìn)行,但在使用某些中性鹽進(jìn)行鹽析時,溫度對鹽溶解度的影響對比明顯。
5、脫鹽:蛋白質(zhì)用鹽析沉積別離后,常需求脫鹽才干獲得純品。zui常用的脫鹽辦法是透析。通過透析袋表里的離子交換,zui后使透析袋內(nèi)溶液的鹽濃度與外界相一致。

 

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