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全新小鼠白介素6ELISA試劑盒操作
更新時間:2018-04-03   點擊次數:2041次

小鼠白介素6ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
 
小鼠白介素6ELISA試劑盒實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白介素6(IL-6)水平。用純化的大鼠白介素6(IL-6)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6),再與HRP標記的白介素6(IL-6)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的白介素6(IL-6)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠白介素6(IL-6)濃度。
 
大鼠白介素6ELISA試劑盒操作步驟:
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
8 ng/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
4 ng/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
2 ng/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
1 ng/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.5 ng/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 

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上海通蔚生物科技有限公司

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